生物学论文_牛病毒性腹泻病毒N~(pro)基因克隆 -辽宁科技学院学报杂志社投稿

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生物学论文_牛病毒性腹泻病毒N~(pro)基因克隆

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摘要：

文章目录

1 材料与方法

1.1 病毒株、菌株、细胞及质粒

1.2 实验动物

1.3 主要试剂及仪器

1.4 引物设计及合成

1.5 Npro基因的扩增

1.6 重组克隆质粒p MD-18T-Npro的构建

1.7 Npro基因进化树的构建及生物信息学分析

1.8 重组原核表达质粒的构建

1.9 Npro蛋白的表达及可溶性分析

1.1 0 重组蛋白的Western blot分析

1.11重组蛋白的纯化及多抗制备

1.12多克隆抗体效价的检测及其蛋白反应原性鉴定

1.13多克隆抗体的特异性鉴定

2 结果

2.1 Npro基因PCR扩增产物的鉴定

2.2 重组质粒p MD-18T-Npro的鉴定

2.3 Npro基因进化树的构建及结构预测

2.4 重组表达质粒p ET-28a-Npro的鉴定

2.5 表达产物的SDS-PAGE鉴定

2.6 表达产物的Western blot鉴定

2.7 纯化产物的SDS-PAGE鉴定

2.8 鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价

2.9 Npro蛋白的反应原性

2.1 0 鼠抗Npro多克隆抗体的特异性

3 讨论

文章摘要:目的研究牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea viruses,BVDV）N-端自身蛋白酶(N^pro)的生物信息学特征及表达特性。方法克隆NADL株BVDV N^pro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定。将纯化的重组N^pro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗N^pro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测。结果 PCR扩增的N^pro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,N^pro基因与BVDV V026株属于同一分支。N^pro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主。重组表达质粒pET-28a-N^pro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组N^pro蛋白相对分子质量约25 000,纯化后纯度达95%以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗N^pro蛋白多克隆抗体效价为1∶128 000,特异性良好。结论成功在大肠埃希菌中表达了BVDV N^pro蛋白,表达的N^pro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV N^pro蛋白的功能奠定了基础。

文章关键词:牛病毒性腹泻病毒,N^pro蛋白,原核表达,生物信息学分析,

项目基金:科技部十三五重点研发项目(2016YFD0500904),

论文作者:王丽^1,2 马骏^1,2 高丽^1,2 赵童^1,2 岳山^1,2 刘宇^1,2

作者单位:1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院 2. 黑龙江省牛病防控工程技术研究中心

论文DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.003414

论文分类号: S852.65

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文章来源：《辽宁科技学院学报》网址: http://www.lnkjxyxb.cn/qikandaodu/2021/0818/601.html